Получение материала

Стандартная биопсия, с получением двух столбиков ткани почек. Материал извлекается из биопсийной иголки в стерильный физиологический раствор комнатной терапии смыванием или при помощи деревянной зубочистки или иглы 18G. Запрещается вытягивание образца, его выталкивание, захват пинцетом. Если в морфологическую лабораторию материал будет транспортироваться, его необходимо помещать в культуральный раствор. С материалом направляется выписка из истории болезни пациента с описанием диагноза.

Оценка материала, деление материала

Образцы помещаются в физиологический раствор. Как можно быстрее после этого материал изучается в препаровочном микроскопе при х10 в капле физиологического раствора. Определяют визуально количество клубочков (красные круглые тельца).

а — биоптат почки с клубочками (красные тельца), б — в биоптате окружающие ткани

Если не удается визуализировать клубочки, то материал фрагментируется следующим образом – по 1 мм с каждого конца столбика отбирается на электронную микроскопию, Оставшиеся образцы делятся почти пополам, большие фрагменты отбираются на иммуногистохимию, меньшие на световую микроскопию, при этом надо чередовать стороны столбиков.

Схема деления столбиков при биопсии

Рассечение материала производится острым новым скальпелем или односторонним лезвием (чистыми, без следов масла или фиксирующего раствора). Образцы для иммунофлюоресценции помещаются в транспортный культуральный раствор. Образцы для световой микроскопии помещают в забуференный 10% водный раствор формалина. В некоторых случаях используют другие фиксирующие растворы [1]. Образцы для электронной микроскопии фиксируют как можно быстрее в 2-3% глютаральдегиде или 1-4% параформальдегиде, забуференном 1% растворе четырехокиси осмия, но не ртутных фиксирующих растворах.

Используя официнальный глютаральдегид, необходимо приготовить фиксирующий раствор, согласно таблице:

Фосфатный буфер10 мл  
Дист Н2О50 мл  
1н NaOH для доведения рН=7,2
50% глутаральдегид (→2,5 %)5 мл  
Дист Н2О до нужного объема100 мл  

Общий объем фиксирующего раствора должен получиться 100мл.   Для сохранения проб для электронной микроскопии пробирка эппендорф подходит, если 1,5 мл, то глютаральдегида примерно 1мл, если эппендорф 2 мл, то глютаральдегида примерно 1,5 мл.

Резка образцов

Резка образцов для световой микроскопии. Во избежание повреждения образец располагается на папиросной бумаге. Резка осуществляется через 2 мкм, как минимум 2 сечения на стекло. Окрашивание – гематоксилин-эозин, PAS (периодическая кислотная реакция Шиффа), серебряный метенамин и трихром.

Резка образцов для ИГХ. Материал помещают в криостат, резка через 2-4 мкм. Окрашивание на наличие IgG, IgM, Ig A, фибрин, каппа, ламбда цепи, по показаниям – амилоид, цепи коллагена IV альфа, CD-классы лимфоцитов при хроническом отторжении трансплантатов и т.п.

Резка образцов для ЭМ. Окраска толуидином синим, срезы 1 мкм. Заливка в парафин или аралдит. Визуализируются клубочки на различных увеличениях.

Описание

В протоколе исследования описываются количество клубочков в препарате, сколько из них с явлениями глобального или сегментарного склероза, прочих клубочковых поражениях, патологии тубулярного аппарата, интерстиция и сосудов.

Пример оформления заключения

Материал: левая почка, биопсия:
Адекватность: адекватная (кора 85%, medulla 15%)
Световая микроскопия: 19 клубочков демонстрируют нормальный размер и клеточность. Нет интерстициального воспаления и нет значительного интерстициального фиброза или канальцевой атрофии. Трубочки сохранились, без существенных признаков травмы. Мелкие артерии и артериолы демонстрируют минимальный интерстициальный фиброз. Васкулита нет.
Иммунофлуоресцентная микроскопия:
Количество клубочков: 4
Не было отложений IgA, IgM, IgG, C3, C1q или фибрина
Электронная микроскопия: обширное стирание отростков подоцитов, покрывающее более 80% поверхности клубочкового капилляра. Гломерулярная базальная мембрана имеет нормальную толщину и в целом гладкий контур. Электронно-плотные отложения не отмечены на базальных мембранах капилляров или мезангиальных областях. Мезангиальная область содержит нормальное количество матрицы и клеток.
Заключение: гистологические признаки фокального сегментарного гломерулосклероза или болезни минимальных изменений

Литература

Walker, P., Cavallo, T. & Bonsib, S. Practice guidelines for the renal biopsy. Mod Pathol 17, 1555–1563 (2004). https://doi.org/10.1038/modpathol.3800239https://www.nature.com/articles/3800239

Jonathan J. Hogan, Michaela Mocanu, Jeffrey S. Berns The Native Kidney Biopsy: Update and Evidence for Best Practice CJASN Feb 2016, 11 (2) 354-362; DOI: 10.2215/CJN.05750515  https://cjasn.asnjournals.org/content/11/2/354#sec-2